实时定量PCR检测白血病相关miRNA方法的建立
本研究建立实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测白血病相关miRNA的方法,探讨此方法在定量检测miRNA中的应用价值.通过提取82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)、70例急性白血病(AL)患者骨髓或外周血标本总RNA,以cDNA为模板进行10倍梯度系列稀释,分别作miRNA及内参U6 RNA的标准曲线并计算扩增效率;运用ABI7300定量PCR仪进行定量检测;采用SYBR Green荧光染料法、以U6 RNA作为内参照、循环阈值(Ct)比较法进行miRNA表达相对定量分析,以检测CLL患者miR-15a、miR-16-1、miR-29b、miR-181b及AL患者miR-128-1、miR-223、let-7b、miR-155、miR-181a的表达.方法学考核参数包括特异性、线性范围、精密度和重复性.结果表明:RQ-PCR检测miRNA仅需10-50 ng总RNA样本,检测下限为0.05 ng,miRNA及U6的Ct值均在15-30之间,10倍系列稀释法制作的标准曲线呈现良好的线性关系(R2＞0.980),扩增效率均在0.9以上,溶解曲线均为单峰,PCR产物经琼脂糖电泳均显示较亮的目的条带,批内差和批间差分别小于4.8%和6.3%.结论:RQ-PCR技术检测白血病相关miRNA敏感、快速,高通量,节约成本,定量范围宽,极大的方便了对miRNA的定量研究.
miRNA、实时定量RT-PCR、白血病
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R733.7;Q503(肿瘤学)
国家自然基金资助项目编号30871104,30971296;江苏省医学领军人才基金资助项目编号LJ200623;江苏省医学重点人才基金资助项目编号RC2007042;江苏省自然基金基助项目编号BK2007249;江苏省"青蓝工程"中青年学术带头人培养对象项目;江苏省"六大人才高峰"资助项目
2013-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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