腺相关病毒2/1型载体转染大鼠骨髓间充质干细胞的实验研究
本研究探计重组腺相关病毒2/1型(recombinant adeno-associated vires 2/1,rAAV2/1)作为载体在不同转染复数、不同时问点转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSC)的效率及对其生长的影响.用含有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)报告基因的rAAV2/1(rAAV2/1-EGFP),以感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为1×104、1×105、1×106转染体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞,在3、7、14天时荧光显微镜下观察EGFP的表达,检测子代细胞的活力、增殖倍数、分化情况,以评估rAAV2/1对BMMSC存活、增殖、分化能力的影响.应用流式细胞仪检测rAAV2/1-EGFP对BMMSC的转染效率及荧光指数(fluorescence index number,FI).结果表明:转染24小时后即可观察到BMMSC发出的绿色荧光,荧光强弱不一,随着时间的延长,荧光的强度逐渐增强,7天后达到稳定的状态;在3、7、14天时不同MOI rAAV2/1-EGFP转染BMMSC的活力、增殖倍数、分化能力无明显变化(p>0.05);在同一感染复数时,7天比3天和14天比7天的增殖倍数显著增强(P<0.01).流式细胞仪检测显示,rAAV2/1-EGFP转染BMMSC的转染率和荧光指数随着MOI增加(1×104、1×105、1×106)和培养时间(3、7、14天)的延长而有不同程度的增加(P<0.05).结论:rAAV2/1-EGFP能有效地转染BMMSC,随转染复数的增加和短期内随转染时间的延长,转染率和荧光指数明显增加.在转染过程中rAAV2/1-EGFP对细胞的活力、生长无影响.对于改造BMMSC,rAAV2/1是一种有效的基因转移载体.
重组腺相关病毒、腺相关病毒2/1、骨髓间充质干细胞、基因转染
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Q78;R329.28(基因工程（遗传工程）)
2013-05-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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