大鼠凝血因子Ⅶ EGFP-EGF1融合蛋白的表达及其结合功能初步研究

摘要：

本研究通过融合蛋白EGFP-EGF1的表达,探讨大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1片段与组织因子(TF)的结合功能.用RT-PCR方法自大鼠肝脏组织获得EGF1编码区基因并将其插入EGFP原核表达载体中,构建pET28aEGFP-EGF1融合蛋白表达载体;将该重组质粒转化大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达EGFP-EGF1融合蛋白;采用亲和层析方法Ni柱纯化融合蛋白,将融合蛋白作用于经脂多糖刺激表达TF的大鼠血管内皮细胞;通过荧光显微镜及流式细胞术观察和检测融合蛋白与细胞结合情况.结果表明:EGFP-EGF1在转化的大肠杆茵中获得高效表达并成功纯化,SDS-PAGE证实分子量约为36kD.荧光显微镜及流式细胞术检测显示该融合蛋白能与内皮细胞膜上的TF结合.结论:大鼠凝血因子Ⅶ上EGF1区可介导FⅦ与TP特异性结合,从而可能为分子靶向抗栓治疗研究提供部分基础.

关键词：凝血因子Ⅶ、组织因子、主动脉内皮细胞、重组融合蛋白

所属期刊栏目：16

分类号：R364.15(病理学)

资助基金：国家自然科学基金30570774

在线出版日期：2008-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：181-184