血管内皮生长因子基因表达定量分析方法的建立及其应用

摘要：

血管内皮生长因子(VEGF)是血管新生的中枢介质,在白血病的病理机制中具有重要作用,也是血液肿瘤患者一种独立的预后因素,但VEGF在白血病细胞分化或凋亡中的重要性尚待阐明.为了查明VEGF在白血病细胞分化或凋亡中的作用,构建了VEGF基因竞争模板(T-VEGFΔ)并建立竞争性定量逆转录聚合酶链反应(cQRT-PCR),以监测全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中VEGF基因表达的改变;通过将系列稀释的靶分子与恒量的竞争模板共扩增,获得标准曲线,用于计算待测样本中靶基因的分子数;在不同时间点分别检测NB4细胞的CD11b抗原表达和NBT还原率.结果显示:cQRT-PCR可作为定量分析VEGF基因表达的有效工具,其测定范围约为1×10 4-2×10 5分子.NB4细胞经ATRA处理0、12、24和48小时后,其VEGF基因转录本的数量分别为42.3×10 5、12.6×10 5、3.6×10 5,低于1.0×10 5/μg总RNA,并伴有CD11b表达上调和NBT还原率增加.结论:成功地建立了cQRT-PCR方法,证明ATRA显著抑制VEGF表达并可能通过抑制血管新生发挥抗白血病的功效.

关键词：血管内皮生长因子、cQRT-PCR、基因表达、细胞分化、全反式维甲酸、NB4细胞

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分类号：R773.7(眼科学)

资助基金：江苏省科技厅社会发展基金BS2001070;江苏省教育厅自然科学基金02KJB320002

在线出版日期：2005-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：548-552