人髓性白血病细胞系U937定向克隆cDNA表达文库的构建及其意义

摘要：

本研究的目的是构建髓性白血病U937细胞系表达型cDNA文库,为肿瘤抗原的筛选奠定工作基础.提取U937细胞总RNA,分离mRNA,反转录合成双链cDNA,消平cDNA末端,连接EcoRⅠ适配子,磷酸化EcoR Ⅰ适配子5′端;XhoⅠ酶切后,丙烯葡聚糖凝胶-S400柱除去小于400 bp cDNA片段,与λZAP表达载体连接,包装蛋白包装后建成cDNA文库;取出1 μl倍比稀释感染大肠杆菌XL1-Blue-MRF′,测定文库大小、重组率;随机挑取10个噬斑,在ExAssist辅助性噬菌体的作用下,释放出PBK-CMV噬菌粒;感染大肠杆菌XLOLR,铺于卡那霉素抗性的LB平板;挑取克隆,37℃震摇过夜;抽提质粒,经EcoR I和Xho I酶切后,初步确定片段的大小及多样性. 结果:构建成含2.87×106重组子的U937细胞cDNA文库,重组子平均插入外源片段长约1.7 kb. 结论:所建文库合格,适合用于筛选目的cDNA克隆.

关键词：U937细胞系、髓性白血病细胞系、cDNA表达文库

所属期刊栏目：11

分类号：Q78;R733.7(基因工程（遗传工程）)

资助基金：卫生部部属管医疗机构临床学科重点项目20012131

在线出版日期：2003-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：355-358