人Delta-like-1胞外区在CHO细胞的表达纯化及对造血祖细胞的扩增作用

摘要：

Notch信号通路在调控造血干细胞的增殖分化中具有重要作用.本研究克隆表达人Notch配体Delta-like-1(Dll-1)的胞外区(hDll-1ext),并观察其对脐带血造血祖细胞的扩增作用.从人骨髓单个核细胞中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Delta-like-1基因胞外区,克隆到T载体.测序正确后,亚克隆到pcDNA3.1/Myc-His(+)A表达载体.用脂质体转染CHO细胞,G418筛选单克隆,Western印迹检测hDll-1ext的分泌表达情况.选择表达量高的细胞克隆,扩增并收集上清.用金属亲和层析柱从上清中纯化融合蛋白hDlll-1ext.利用免疫磁性分离方法分离脐带血CD34+细胞.结果表明,RT-PCR方法检测到脐带血CD34+细胞表达Notch-1受体.在含rhIL-3,rhSCF及rhVEGF的脐带血CD34+细胞无血清培养体系中,加入纯化的hDll-1ext,通过集落培养检测hDl-1ext对造血祖细胞的扩增作用.含hDll-1ext组中CFU-Mix和HPP-CFC数量是对照组的1.5倍,结论:重组的hDll-1ext对原始的造血祖细胞具有扩增作用.

关键词：Delta-like-1、Notch、CHO细胞、造血祖细胞

所属期刊栏目：11

分类号：R331.2;Q78(人体生理学)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划G1999053900;国家高技术研究发展计划863计划2001AA216161

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：222-226