重组糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂的表达和纯化

摘要：

观察糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂重组GST-KGDX(谷胱甘肽S-转移酶-赖-甘-天冬-X)融合蛋白对血小板聚集的抑制作用.设计合成了两条编码KGDX(赖-甘-天冬-X)的寡核苷酸链,两端分别为BamHI和XhoⅠ酶切位点.将该基因插入原核高效表达载体pGEX-4T-1的tac启动子下游,获得重组质粒pGEX-4T-1KGDX,转化大肠杆菌DH5a,37℃诱导使重组子表达.GST-KGDX融合蛋白具有可溶性,产量为35 mg/L培养基,表达量占菌体总蛋白的48.02%.破碎菌体上清经谷胱甘肽-琼脂糖悬珠亲和层析法获得纯度为95%的重组蛋白.血小板凝聚仪检测活性表明,在体外GST-KGDX融合蛋白抑制ADP诱导的人血小板聚集作用强于GST(P＜0.05或＜0.01).全血流式细胞术结果表明,GST-KGDX能与GPⅡb/Ⅲa受体特异性结合.结论:大肠杆菌中能够表达出较高产量的GST-KGDX融合蛋白,为抗血小板药物提供了一个很好的蛋白质来源.

关键词：糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂、GST-KGDX融合蛋白、抗血小板作用

所属期刊栏目：10

分类号：R973.2;R331.143;Q78(药品)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：535-539