转染mFas配体的COS-7细胞诱导Fas+淋巴瘤细胞系(Yac-1)凋亡

摘要：

本研究探讨通过Fas配体(Fasligand,FasL)-Fas途径进行免疫治疗淋巴瘤的可能性.常规转化pBillneo-mFasL至大肠杆菌DH5α,经扩增、质粒抽提和纯化后,进行限制性内切酶酶切、mFasL基因PCR及其产物DNA测序,以鉴定pBillneo-mFasL内mFasL基因一级结构及插入方向;用脂质体法转染pBillneo-mFasL至猴肾COS-7细胞,G418选择培养后,Western印迹分析外源性mFasL cDNA基因表达水平,将高表达mFasL的COS-7细胞与Fas+小鼠淋巴瘤细胞系Yac-1以不同比例混合培养,5J时后收集悬浮的Yac-1细胞,用膜联蛋白(annexin)V/PI标记后,借助FCM观察细胞凋亡率.结果表明,质粒pBillneo-mFasL的EcoRI酶切获得920bp和7 227bp产物,HomdⅢ酶切获得1 293bp和6 807bp产物,初步证实插入mFasL cDNA片段与理论预计大小一致,并系正向插入;PCR扩增出自起始密码子(ATG)至终止密码子(TAA)后+36bp的mFasL cDNA全长890bp序列,DNA测序结果与基因库已知序列完全一致;pBillneo-mFasL转染COS-7细胞,并经G418选择培养后,Western印迹检测到明显mFasL蛋白质表达;当用这种高表达mFasL蛋白质的COS-7细胞与Fas+Yac-1细胞以1:1,5:1和10:1混合培养5 小时后,用annexin V/PI标记悬浮Yac-1,结果后者凋亡率分别为(22±4.8)%,(32.18±7.8)%和(51.8±5.4)%,与对照转染空质粒pBillneo的COS-7细胞组存在显著差异(P＜0.01).结论:通过FasL-Fas抗原途径体外具有明显杀伤高表达Fas抗原的淋巴瘤细胞的作用.

关键词：Fas、Fas配体、基因转染、淋巴瘤细胞系、免疫治疗、细胞凋亡

所属期刊栏目：10

分类号：R733.1(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金39770767

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：327-331