人CD40-Ig融合蛋白表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达

摘要：

CD40/CD40L途径是除B7/CD28途径之外的重要的共刺激信号转导途径,在T细胞活化过程中扮演着十分关键的角色.因而,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用.本研究旨在获得人CD40分子胞外区和人IgG 1 Fc段的融合蛋白,以探索阻断CD40/CD40L共刺激途径在免疫治疗中的潜在应用.首先,从人B淋巴瘤细胞系Daudi中提取细胞总RNA,利用RT-PCR技术扩增人CD40分子胞外区基因,将扩增产物连接入pGEM T Easy载体中构建克隆载体pGE40,利用全自动DNA测序仪进行序列测定.将测序正确的胞外区片段插入至含人IgG 1类抗体重链基因组序列的pIG 1载体中构建瞬时表达载体,命名为pIG/40 Ig.用DEAE-Dextran/Chloroquine法转染COS-7细胞,夹心ELISA法和Western印迹分析鉴定培养上清中CD40-Ig融合蛋白的表达及免疫学活性.在重组载体pIG/40 Ig转染COS-7细胞后,ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达;Western印迹鉴定发现在相对分子量50 kD左右有一特异条带,该分子可同时被抗人CD40单抗G28-5和抗人Ig γ链的单抗识别.本研究成功地扩增人CD40基因并构建了人CD40-Ig融合基因表达载体,在C0S-7细胞中获得功能性表达,为进一步研究CD40/CD40L途径在移植物抗宿主病的预防与治疗中的可能作用奠定了基础.

关键词：CD40、Ig、CD40-Ig、融合蛋白、COS-7细胞、基因表达

所属期刊栏目：8

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：14-19