禽腺病毒血清4型fiber-2和penton蛋白亚单位疫苗初步研究及免疫效果评价

摘要：

选取禽腺病毒血清4型(fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)JLJ13株的fiber-2和penton蛋白作为保护性抗原,利用SWISS-MODEL网站对fiber-2蛋白空间结构进行模拟,截取其主要功能区fiber-2-Shaft2替代fiber-2,进行密码子优化后,将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白基因序列克隆到pET28a(+)载体上并送至北京天一辉远生物科技有限公司进行基因合成,将合成的质粒分别命名为pET-28a-msyb-fiber-2-Shaft 2和pET-28a-msyb-penton.通过原核表达系统进行蛋白表达并使用镍柱纯化.经BCA定量后,用PBS分别将fiber-2-Shaft 2和penton蛋白质量浓度稀释至1 000,500,250 mg/L,再将相同质量浓度的fiber-2-Shaft 2和penton蛋白按1∶1体积比混合后作为抗原,配伍ISCOMs佐剂,0.2 mL/只免疫30日龄SPF鸡,即高剂量组免疫fiber-2-Shaft 2和penton蛋白各100 μg、中剂量组各50 μg、低剂量组各25 μg.一免后14 d进行二次免疫,采集二免后7,14,21 d血清检测特异性抗体和中和抗体,并在二免后21 d攻毒.结果显示,成功表达出fiber-2-Shaft 2和penton蛋白,大小分别为69,93 kDa,镍柱纯化后可获得高纯度的蛋白;二免后14 d高中低量组的中和效价依次为1 280,640,640,攻毒后阴性对照组表现出明显的临床症状,2～3 d后死亡,疫苗组均未出现任何临床症状.结果表明,利用禽腺病毒血清4型JLJ13株fiber-2-Shaft 2和penton蛋白混合配伍ISCOMs佐剂制备的亚单位疫苗免疫保护效果明显.

关键词：禽腺病毒血清4型、fiber-2、pentoni、亚单位疫苗、免疫效果评价

所属期刊栏目：43

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：陕西省国际科技合作与交流计划资助项目2015KW-027

在线出版日期：2023-09-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1162-1166,1186