10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.01.15
应用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术检测柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶N377D突变
面对严重鸡球虫病的磺胺耐药性,传统检测磺胺耐药的方法已无法满足临床应用,因此建立一种新的磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫检测方法具有重要意义.本研究建立了一种使用四引物扩增阻滞突变体系PCR技术(amplification refractory mutation system-PCR,ARMS-PCR)用于准确区分柔嫩艾美耳球虫二氢蝶酸合酶(dihydropteroate syn-thase,DHPS)基因中的点突变(A1129G).对ARMS-PCR反应进行优化,最佳内外引物工作浓度比是5 ∶ 1,Mg2+的最优工作浓度为10 mmol/L,dNTP的最优工作浓度为0.15 mmol/L,最佳Taq酶体积为0.1 μL,最佳退火温度为62℃.本研究发现在合适的PCR体系下,能够检测出含有磺胺耐药柔嫩艾美耳球虫的最低检测限为40 fg,表明该方法灵敏度良好;通过在1对内引物(F-inner377s/R-inner377r)上倒数第3位碱基上分别引进错配,使该方法的特异性提高.因此,ARMS-PCR方法是一种简单快速的用以区分临床分离株单核苷酸多态性(single nucleotide poly-morphism,SNP)的基因分型方法.
鸡球虫病、耐药性、四引物扩增阻滞突变体系PCR技术、单核苷酸多态性
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S852.7(动物医学(兽医学))
国家重点研发计划2016YFD0501303
2023-04-03(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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