牛纽布病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要：

牛纽布病毒(bovine nebovirus,BNeV)是国内近几年发现的引起犊牛腹泻的新病原,为了建立快速、准确且能定量分析BNeV的检测方法,本试验根据GenBank上发布的BNeV聚合酶基因(RdRp)序列设计合成了 1对特异性引物和1条探针,并通过优化反应体系,成功建立了 BNeV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法并对临床样品进行检测.结果表示,该方法最佳上下游引物浓度均为500 nmol/L,探针浓度为400 nmol/L,在1×108～1×101拷贝/μL之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R2=0.996,扩增效率为105.9％;该方法特异性较强,在多个犊牛腹泻相关病原中,只检测出BNeV;敏感性较高,对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×101拷贝/μL,而普通PCR对BNeV质粒标准品最低检测下限为1×103拷贝/μL;重复性较好,组内变异系数和组间变异系数均小于3％;对2021年3-5月采自内蒙古地区牧场的37份犊牛粪样中BNeV的检出率为35.1％,通过标准曲线计算其病毒载量,其中腹泻粪样平均病毒载量为8.7×105拷贝/μL.本研究建立的BNeV TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的特异性强、稳定性好、灵敏度高,为BNeV的检测和分子流行病学调查提供了有力的手段.

关键词：牛纽布病毒、荧光定量RT-PCR、犊牛腹泻、特异性、敏感性、重复性

所属期刊栏目：43

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：内蒙古自治区科技重大专项资助项目2020ZD0006

在线出版日期：2023-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：66-71