猪瘟病毒E0+E2基因的串联表达及多克隆抗体制备

摘要：

串联表达猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)E0和E2蛋白,并制备多克隆抗体鉴定其免疫原性,为进一步研究亚单位疫苗和猪瘟ELISA抗体检测方法提供材料.应用PCR技术分别扩增CSFV E0和E2基因片段,运用重叠PCR将其串联扩增后克隆至pET-28a载体,构建重组表达质粒pET-28a-E0+E2.通过大肠杆菌表达系统表达重组蛋白E0+E2,切胶纯化后免疫昆明小鼠制备血清,通过间接ELISA方法测定抗体水平,间接免疫荧光(IFA)分析多克隆抗体的免疫原性和特异性.结果显示,37℃,1 mmol/LIPTG诱导条件下,E0+E2蛋白能够以包涵体形式表达,经纯化复性后免疫小鼠,制备的血清能与感染CSFV的细胞特异性反应.在大肠杆菌中高效表达了 E0+E2蛋白,制备的多克隆抗体具有较高的特异性和反应性.

关键词：猪瘟病毒、E2蛋白、E0蛋白、串联表达、多克隆抗体

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：番禺区创新创业领军团队资助项目;广东省现代农业产业技术体系生猪产业体系资助项目;广州市科学研究计划重点资助项目;广东省重点领域研发计划资助项目

在线出版日期：2023-04-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：35-40