VDAC1参与调控BCG感染RAW264.7细胞凋亡

摘要：

旨在研究电压依赖性阴离子通道(voltage dependent anion channel1,VDAC1)对卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的调控作用及其机制.设计并合成VDAC1的小干扰RNA(si-VDAC1)转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后,再用BCG感染.后续采用MTT法检测RAW264.7细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位及细胞内ROS水平,进而通过实时荧光定量PCR和Western blot检测凋亡相关因子Cyt C、Caspase-3、PARP1、Caspase-9基因(mRNA)及其蛋白的表达.随后,通过使用VDAC1寡聚抑制剂VBIT-4对RAW264.7进行孵育2 h后感染BCG,并采用免疫荧光染色技术观察Caspase-3和Western blot检测凋亡相关因子 Cyt C、Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP1、Cleaved-Caspase 9 的含量变化.BCG 感染巨噬细胞 12 h 后,与对照相比,BCG感染后小鼠巨噬细胞存活率约下降至50％,而凋亡率显著上调到52.12％(P＜0.001),线粒体膜电位降低(P＜0.001),细胞内ROS水平升高(P＜0.001),并且凋亡关键调控因子Cyt C、Caspase-3、PARP1、Caspase-9的mRNA及蛋白表达水平显著上调(P＜0.001);当用si-VDAC1和BCG共同处理小鼠巨噬细胞时,细胞存活率、细胞凋亡率、线粒体膜电位水平、细胞内ROS水平及凋亡关键调控因子均显著得到了恢复(P＜0.001);使用VDAC1寡聚抑制剂VBIT-4处理后同BCG处理组相比,VBIT-4显著抑制了VDAC1寡聚体的形成和凋亡相关因子Cleaved-Caspase 3、Cleaved-PARP1、Cleaved-Caspase 9剪切体的含量(P＜0.001).结果表明,VDAC1可通过寡聚形成大的通道影响线粒体外膜通透性,通过Cyt C等凋亡蛋白释放的途径参与调控BCG感染RAW264.7诱导的细胞凋亡.

关键词：电压依赖性阴离子通道、调控、RAW264.7细胞、卡介苗、细胞凋亡

所属期刊栏目：42

分类号：S855.2(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金

在线出版日期：2022-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：1878-1888