边界病病毒RT-PCR检测方法的建立和应用

摘要：

边界病(border disease)由边界病病毒(border disease virus,BDV)引起,导致绵羊和山羊持续感染和繁殖疾病,2012年在国内首次报道,但目前尚无特异的RT-PCR方法对该病原进行检测.本研究通过比对黄病毒科瘟病毒属病毒的全基因组序列,以3'-UTR基因为靶基因,设计了特异扩增BDV的引物.通过构建重组质粒pMD18-T-BDV,以其作为标准品建立了BDV的RT-PCR检测方法.进一步优化该方法的反应条件,并进行特异性、敏感性及临床样品检测.结果显示,该方法在退火温度48～60℃时均可特异扩增BDV,通过检测牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV-1)、牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV-2)和猪瘟病毒(CSFV)提取的RNA,该方法可特异扩增BDV而对其他同属病毒检测均呈阴性,表明其特异性良好;同时,该方法具有良好的敏感性,最低检出限可达101拷贝/μL,敏感性极高.利用该方法检测BDV持续感染羊和人工感染羊,发现持续感染羊的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、淋巴结、卵巢、脑等器官均可检测到BDV,而人工感染羊只能在感染3～7 d的血液和淋巴结中检测到病毒RNA,其他器官中未检测到病毒.本研究建立了特异检测BDV的RT-PCR方法,并证明了BDV在持续感染羊和一过性感染羊中的病毒分布情况,为其可能的排毒途径提供了依据.

关键词：边界病病毒、RT-PCR检测方法、条件优化、应用

所属期刊栏目：42

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;兽医生物技术国家重点实验室开放基金资助项目;亚夫科技服务资助项目

在线出版日期：2022-10-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1786-1789,1816