产气荚膜梭菌多重PCR检测方法的建立及初步应用

摘要：

旨在建立一种高效、快速、准确的检测产气荚膜梭菌并分型的多重PCR方法.根据GenBank上公布的产气荚膜梭菌a、β、ε、?毒素的基因序列,设计、合成4对针对4种毒素的特异性引物.并通过改变引物浓度、退火温度等反应条件,对多重PCR方法进行优化.结果显示,对产气荚膜梭菌a、β、ε、?毒素基因均扩增出了预期大小的目的条带,而金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、停乳链球菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌均未出现条带;当核酸质量浓度降至12.5 μg/L时,仍可清晰地扩增出a、β、e、?毒素基因对应条带.在核酸质量浓度降至3.12 μg/L时,仍可观察到a与e毒素基因扩增出的条带.在核酸质量浓度降至0.78μg/L时,a毒素基因对应的条带仍可隐约可见.应用该方法对68份疑似产气荚膜梭菌导致猝死的牛鼻拭子样进行检测,其中有52份样品检测结果显示为C型产气荚膜梭菌,剩余16份样品均为非产气荚膜梭菌,阳性率为76％.结果表明,本研究建立的多重PCR方法特异性强、灵敏度高重复性好,可准确地鉴别区分5种类型的产气荚膜梭菌.在采样时仅需采取疑似病畜的鼻拭子,操作简便、快捷、安全.对临床检测病畜的产气荚膜梭菌病有较为重要的意义.

关键词：产气荚膜梭菌、多重PCR、a毒素、β毒素、e毒素、毒素

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分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：东西部科技合作优质肉牛精准化养殖技术研究与示范资助项目;宁夏奶牛育种专项优质高产奶牛安全健康养殖技术研究与示范资助项目

在线出版日期：2022-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1591-1596