猪圆环病毒2型病毒样颗粒的制备及免疫原性评价

摘要：

旨在利用原核表达系统在大肠杆菌中制备出猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),用改良的镍亲和层析法纯化并在小鼠体内评价其免疫原性.通过PCR方法从发病猪中扩增出PCV2的ORF2序列,对其全长进行密码子优化并交由公司合成重组质粒pET-32a-yCap;以BL21(DE3)为表达菌株,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE与Western blot对Cap蛋白的表达方式及抗原特异性进行鉴定;利用改良的镍亲和层析法纯化带有His-Tag标签的重组蛋白;利用透射电镜观察所纯化的载体融合蛋白能否形成VLP;用 自制的VLP疫苗与PCV2灭活疫苗(ZJ/C株)分别免疫小鼠,利用商业化PCV2 IgG抗体ELISA检测试剂盒评价其免疫原性.结果显示,成功得到PCV2 ORF2序列和重组质粒pET-32a-yCap,重组质粒在大肠杆菌中主要以可溶性蛋白形式表达,蛋白大小为47 kDa;经镍亲和层析法纯化可得到单一的目的蛋白;重组Cap蛋白能与PCV2多克隆抗体及HRP标记的6 * His,His-Tag小鼠单克隆抗体发生特异性结合;经过磷钨酸负染色的蛋白悬液在透射电镜下可观察到大量规则的、直径在17～20 nm的VLP;2种疫苗均能诱导刺激小鼠产生抗体应答反应,VLP组诱导产生的水平更高.综上所述,本研究实现了 PCV2 Cap蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达,经改良的镍亲和层析法可得到单一的 目的蛋白,能够在体外自发的组装成病毒样颗粒,免疫小鼠后可刺激抗体应答反应,可用于制备亚单位疫苗及相关生物制品.

关键词：猪圆环病毒2型、Cap蛋白、可溶性表达、病毒样颗粒

所属期刊栏目：42

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北省重点研发计划资助项目;河北省农业产业技术体系生猪创新团队资助项目

在线出版日期：2022-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1529-1534