牦牛METTL14 CDS区克隆及表达谱分析

摘要：

旨在克隆牦牛甲基转移酶样蛋白(methyltransferase-like protein 14,METTL14)基因的编码区(CDS)序列,探究其分子特征及时空表达规律.以大通牦牛脂肪组织cDNA为模板,通过克隆获得METTL14的完整CDS区序列,用生物学软件进行基因序列和蛋白质结构分析,利用qRT-PCR检测METTL14的时空表达规律.结果显示,大通牦牛METTL14的CDS区全长1 371 bp,共编码456个氨基酸;METTL14亲缘关系与野牦牛最近,与鸡和小鼠最远;氨基酸等电点是5.89,不稳定系数(Ⅱ)为52.02,GRAVY=-0.878,METTL14总体表现出强的亲水性;MET-TL14 有1个大小为177 aa的MT-A70酶保守结构域,无信号肽与跨膜结构域;亚细胞定位与核定位预测分析都显示METTL14位于细胞核(69.60％).推测METTL14共有40个潜在的磷酸化位点.METTL14蛋白高级结构由无规则卷曲(51.10％)、α-螺旋(33.11％)、延伸链(11.84％)和β-转角(3.95％)相互连接而成.METTL14与甲基化修饰相关蛋白相互作用,主要参与RNA甲基化修饰过程.qRT-PCR结果显示,METTL14基因在牦牛7个组织中均有表达,相比脂肪组织中的表达,背最长肌中表达量最高(P＜0.001);在牦牛生长发育的不同阶段,前体脂肪细胞中METTL14的表达量也有差异,30月龄＞18月龄(P＜0.05);进一步研究发现,在牦牛前体脂肪细胞分化过程中,METTL14表达量在0,4,8,12 d呈现上升的趋势,在4,8 d的表达量显著高于0 d(P＜0.05),12 d的表达量极显著高于0d(P＜0.01).结果表明,大通牦牛METTL14是一个具有MT-A70酶保守结构域的定位在细胞核上的酸性不稳定水溶性蛋白,在牦牛脂肪沉积过程中发挥着重要的作用.本试验进一步为METTL14在牦牛脂肪沉积中的调控机制研究奠定理论基础.

关键词：大通牦牛、甲基转移酶样蛋白14、生信分析、时空表达规律

所属期刊栏目：42

分类号：S823.85;S852.2(家畜)

资助基金：甘肃省重点研发计划资助项目;国家自然科学基金;中国农业科学院牦牛资源与育种创新团队资助项目

在线出版日期：2022-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：962-972,980