胞内劳森菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为建立用于检测临床粪便样品中胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,L.intracellularis)的TaqMan荧光定量PCR方法,本研究参考GenBank中发表的L.intracellularis PHE/MN1-00株基因组序列设计50对引物,通过SYBR Green Ⅰ荧光染料法PCR验证引物的特异性,针对扩增效率最好的特异性上、下游引物合成相应的TaqMan探针,优化反应条件,对其线性范围、敏感性和重复性进行验证,系统的完成了该方法的建立.结果表明,所建立的TaqMan荧光定量PCR方法,特异性强;在靶标核酸为2.95×101～2.95×106拷贝/μL区间线性关系良好,相关系数R2=0.998 1,扩增效率为96.51％;最低检测浓度为5拷贝/μL;批间和批内的CV均小于2％,重复性好.使用普通PCR方法与本方法对2020年10月至2021年2月采自江西地区猪场的373份粪便样品进行检测,L.intracellularis的总检出率分别为21.4％(80/373)和27.6％(103/373),显示本方法具有更高的敏感性,其检测场阳性率为88.9％(8/9),各阶段生产猪群阳性率分别为经产母猪28.7％、保育仔猪36.4％和育肥猪14.3％.该检测结果为江西地区的L.intracellularis的流行情况提供参考.

关键词：胞内劳森菌、TaqMan实时荧光定量PCR、检测

所属期刊栏目：42

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金;江西省科技支撑计划资助项目;江西省科技支撑计划资助项目;江西省现代农业产业技术体系建设专项基金资助项目

在线出版日期：2022-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：680-685