表达猪δ冠状病毒S1蛋白植物乳杆菌的构建及验证

摘要：

本研究拟构建猪δ冠状病毒(PDCoV) S1蛋白的重组植物乳杆菌.通过PCR方法扩增含1320信号肽和DCpep优化的PDCoV S1基因,利用无缝克隆技术将扩增片段克隆至植物乳杆菌表达载体pSIP411,并将pSIP411电转至宿主乳酸乳球菌NZ3900,扩增后提取质粒并验证,获得重组质粒NZ3900:pSIP411-PDCoV S1.将重组质粒电转入植物乳杆菌LP18,获得重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1,对诱导时间、诱导剂质量浓度、诱导温度等表达条件进行优化,以获得最佳表达条件.结果 显示,成功扩增出1939 bp经过修饰和优化的目的 基因PDCoV S1,成功构建了重组植物乳杆菌LP18:pSIP411-PDCoV S1.Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法表明重组蛋白能够在重组植物乳杆菌中表达,最佳表达条件:诱导时间为6h、诱导剂质量浓度为150 μg/L、诱导温度为33℃.本试验成功构建了1株高表达PDCoV S1蛋白的植物乳杆菌,为PDCoV口服候选疫苗的研制奠定基础.

关键词：PDCoV;S1蛋白;植物乳杆菌;构建与表达

所属期刊栏目：41

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程资助项目2019RU059

在线出版日期：2022-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2304-2310,2369