抗登革病毒人源化单克隆抗体h1A1D的构建及纯化

摘要：

构建抗登革病毒(dengue virus,DENV)人源化单克隆抗体,并对其表达及纯化.利用PDB数据库公布的鼠源抗DENV单克隆抗体1A1D的轻重链可变区氨基酸序列以及GenBank公布的人源抗体轻重链恒定区氨基酸序列,通过基因工程改造为抗DENV人源化单克隆抗体h1A1D,提取转染级质粒;轻重链质粒混合后转染CHO-K1细胞表达抗体,Protein A亲和介质进行抗体纯化,测定所得抗体蛋白质量浓度,SDS-PAGE蛋白电泳分析所获得人源化抗体的相对分子质量大小和纯度;Western blot检测其结合能力.结果 显示,构建抗DENV人源化单克隆抗体h1A1D轻链和重链的表达载体,在CHO-K1细胞中稳定表达后,经Protein A亲和介质纯化后,获得1株抗DENV人源化单克隆抗体h1A1D;纯化后抗体的蛋白质量浓度为1.42 g/L,SDS-PAGE电泳分析h1A1D二价抗体的轻重链大小分别为30,55 kDa,完整抗体约为190 kDa,能有效结合含有DENV 4种血清型的E基因的串联蛋白.结果 表明,成功构建抗DENV人源化单克隆抗体h1A1D,采用Protein A亲和介质纯化,为后期人源化单克隆抗体的制备纯化的研究奠定了基础,为DENV的机制研究以及抗体治疗药物的开发提供参考.

关键词：登革病毒;人源化单克隆抗体;Protein A介质纯化

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技重大专项资助项目2018ZX10101003

在线出版日期：2021-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1757-1761