PEDV-RBD基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

摘要：

受体结合域是决定病毒侵入宿主及其嗜性的关键因素.该研究目的 在于获得具有天然构象且反应原性良好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的受体结合域(receptor-binding domain,RBD)蛋白.根据PEDV S蛋白序列(GenBank登录号:AKN45969.1),设计、优化并合成其RBD部分基因序列,并将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBacTM Dual上,得到了重组质粒pFBD-PER.将pFBD-PER转化到大肠杆菌DH10BacTM感受态细胞中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒Bacmid-PER,通过脂质体转染至Sf9细胞中进行病毒拯救.转染120 h后,收取上清病毒液,盲传3代后收取Sf9细胞,利用间接免疫荧光法(IFA)及Western blot确定PEDV-RBD蛋白是否表达.结果 显示,重组质粒pFBD-PER酶切验证正确,重组杆粒Bacmid-PER成功构建,杆状病毒能够表达PEDV-RBD蛋白,且能与strep tag抗体发生特异性反应.IFA鉴定出现特异性绿色荧光.结果 表明,成功表达了PEDV-RBD蛋白且具有反应原性,为深入开展PEDV抗体制备、新型疫苗研发奠定基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒;S蛋白;杆状病毒;受体结合域;蛋白表达

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国医学科学院医学与健康科技创新工程资助项目2019RU059

在线出版日期：2021-10-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1710-1715,1733