犬弓形虫抗体间接ELISA检测方法的建立

摘要：

为建立犬弓形虫抗体间接ELISA(iELISA)诊断方法,本研究对弓形虫TgCyP基因进行重组表达,纯化获取重组蛋白并进行Western blot检测,方阵滴定法确定纯化好的重组蛋白抗原最佳包被质量浓度和血清稀释度,优化包被条件、酶标二抗稀释度、封闭液和封闭时间等,建立犬弓形虫抗体iELISA诊断方法,并对建立的iELISA检测方法进行重复性、敏感性、特异性试验和临床检测.结果 显示,抗原最佳包被质量浓度为1 mg/L,最佳包被条件为4℃包被过夜,最佳封闭条件为5％脱脂奶粉37℃作用2h.待检血清以1∶200稀释后37℃作用60 min效果最佳,酶标二抗以1∶4000稀释后37℃孵育60 min效果最佳.临界值为0.298,待检血清D450nm值＞0.298则确定为阳性.重复性试验中变异系数均低于10％,具有良好的稳定性;与CPIV、RABV、CDV、CPV、CAV阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性;将犬弓形虫阳性血清稀释至1∶6400仍显示为阳性,敏感性好.应用建立的iELISA和金标准MAT对226份犬的临床血清进行检测,阳性率分别为24.34％和29.64％,两者符合率达94.70％.本试验建立了一种快速有效的诊断犬弓形虫抗体的iELISA方法,为犬感染弓形虫病的检测奠定基础.

关键词：犬、弓形虫、原核表达、间接ELISA

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分类号：S852.72;S855.9(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划"畜禽重大疫病防控与高效安全养殖综合技术研发"重点专项"宠物疾病诊疗与防控新技术研究"资助项目2016YFD0501004

在线出版日期：2021-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1074-1079,1093