捻转血矛线虫疫苗候选抗原H11亚型基因的序列结构及启动子活性分析

摘要：

捻转血矛线虫微粒体氨肽酶H11是有效的疫苗候选抗原,其重组蛋白免疫保护效果可能与基因亚型相关.为分析H11亚型基因的序列结构及启动子活性,本研究扩增并鉴定了H11-1、H11-2亚型基因的开放阅读框(2937,299 bp),发现其与已知H11 (H11-3)、H11-4亚型氨基酸序列高度同源,具有保守的糖基化位点、跨膜区及微粒体氨肽酶活性中心锌指基序.分段扩增获得了H11-1、H11-2、H11-4亚型基因DNA序列(11698,17995,19804 bp),比对分析发现,与H11(H11-3)基因结构相似,H11-1、H11-2亚型基因均含25个外显子和24个内含子,通过典型的GT… AG结构剪接,对应的外显子大小基本一致,内含子大小各异,同源性低;推测各亚型不是由同一基因选择性剪接形成,但剪接模式相同.运用基因步移技术扩增鉴定了H11-1、H11-2、H11-4亚型基因5'侧翼区(4606,3465,2361 bp),利用pPD95.77载体构建了重组表达载体,通过显微注射将其导入秀丽线虫观察其启动转录活性,结果表明H11-45'侧翼区可启动GFP在秀丽线虫除胚胎以外的各时期表达,且表达集中于虫体肠道起始和末端;未检测到H11-1或H11-25'侧翼区启动的GFP表达,推测其转录活性或GFP表达较弱.本研究为后续探明H11基因各亚型生物学功能、参与免疫保护机制及高效重组疫苗研究奠定了基础.

关键词：捻转血矛线虫、H11亚型基因、5’侧翼区、启动转录活性

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分类号：S852.73(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划资助项目;浙江省基础公益研究计划资助项目;中央高校基本科研业务费专项资金资助项目

在线出版日期：2021-07-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：929-936