牛支原体P48膜蛋白的原核表达及生物信息学分析

摘要：

对牛支原体(M.bovis)主要免疫蛋白P48蛋白的保守性和蛋白结构与功能进行分析,为进一步对P48蛋白的免疫特性和致病机制研究奠定基础.本研究通过获取M.bovis Ningxia-1菌株P48蛋白基因序列,构建pET28a-P48质粒并导入大肠杆菌BL21感受态细胞进行原核表达,并通过Ni拄进行重组蛋白纯化、SDS-PAGE电泳和免疫小鼠试验进行验证;利用生物信息学工具分析P48蛋白核酸序列的保守性和蛋白序列的理化性质、二级结构、疏水区、跨膜区、信号肽、亚细胞定位、抗原表位、三级结构及不同碱基的突变对该蛋白功能的影响.结果 表明,通过大肠杆菌原核表达系统可以成功表达重组P48蛋白,并且该蛋白可以激发小鼠产生较高水平的抗体;P48蛋白核酸序列保守,在不同M.bovis菌株中碱基序列无差异;P48蛋白相对分子质量为51 159.08,含有468个氨基酸,其中强酸性氨基酸57个,强碱性氨基酸63个,极性氨基酸116个,疏水氨基酸169个,等电点为8.776;1～24位为P48蛋白的信号肽,具有较强的疏水性,并且为跨膜螺旋区;二级结构包含alpha helix、beta sheet、beta turn、random coil 4种形式;抗原表位有13个区域;P48蛋白位于细胞内膜上,是膜脂蛋白家族中ABC转运体的溶质结合蛋白2;该蛋白存在多个突变敏感区域,该区域的改变可能直接影响P48蛋白的功能.本研究的开展为M.bovis P48蛋白的免疫特性和致病机制研究奠定了基础,为M.bovis抗体检测试剂的研制和M.bovis病原的诊断提供了科学的依据.

关键词：牛支原体、P48蛋白、原核表达、生物信息学

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分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：宁夏回族自治区重点研发计划资助项目;银川市农业应用开发推广资助项目;宁夏回族自治区西夏区重点研发计划资助项目

在线出版日期：2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1124-1130