犬源干扰素刺激基因ISG15和IFIT2荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

干扰素刺激基因在抗病毒及调节IFN信号通路的过程中具有重要作用.本课题组前期对犬瘟热病毒(CDV)感染宿主前后全转录组进行测序分析,发现干扰素刺激基因ISG15和IFIT2明显上调,为了进一步探究ISG15和IFIT2对CDV感染的影响,本研究设计合成了犬源ISG15、IFIT2和持家基因GAPDH的特异性引物,分别进行PCR扩增,构建质粒标准品,建立荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行检验.结果 表明,犬源ISG15、IFIT2和GAPDH的荧光定量PCR标准曲线的相关性R2均大于0.98,表明线性关系良好.ISG15、IFIT2和GAPDH的融解曲线均为单峰,扩增产物单一,且峰值一致,表明建立的荧光定量PCR方法特异性良好.组内与组间的变异系数均小于0.2％,表明该方法重复性较好.对CDV感染宿主细胞前后的ISG15和IFIT2 mRNA表达水平进行检测,发现CDV感染后ISG15和IFIT2的表达量升高,表明ISG15和IFIT2在CDV感染过程中发挥重要作用.该结果为针对CDV与干扰素抗病毒研究的开展提供重要的技术手段,并为进一步揭示CDV致病的分子机制奠定基础.

关键词：犬瘟热病毒、干扰素刺激基因、ISG15、IFIT2、荧光定量PCR

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分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：中国农业科学院创新工程基金资助项目;中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助项目

在线出版日期：2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1119-1123,1135