核因子I/A(NFIA)依赖其N末端的DNA结合结构域抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制

摘要：

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)严重危害世界养猪业,目前仍无有效防控策略,因此探究宿主内源性蛋白拮抗PRRSV的分子机理意义重大.前期试验发现核因子I/A(nuclear factor I/A,NFIA)可以有效抑制PRRSV复制,故本试验以非洲绿猴胚胎肾细胞Marc-145细胞为模型,对NFIA抑制PRRSV复制的分子机理进行了深入探究.首先,构建NFIA的N末端DNA结合结构城缺失质粒pcD-NA3.1-Flag-ΔN和C末端转录激活结构域缺失质粒pcDNA3.1-Flag-AC并分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后用qRT-PCR和Western blot的试验方法分别检测病毒N蛋白的RNA和蛋白表达水平.结果 显示△C仍能有效降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,但ΔN则不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,这表明NFIA的N末端结构城是抑制病毒的关键.其次,对NFIA全长质粒pcDNA3.1-Flag-WT进行N末端结构城内不同功能位点的双碱基突变,分别破坏掉NFIA的促腺病毒复制功能(Mut1,YR86～87WL)、DNA结合功能(Mut2,LR119～120VD)和二聚化功能(Mut3,LF135～136VD),将突变质粒分别转染Marc-145细胞,24 h后感染PRRSV,48 h后通过qRT-PCR和Western blot检测发现,Mut2和Mut3不再能降低PRRSV的RNA水平和N蛋白水平,说明N端结构城的DNA结合功能位点和二聚化功能位点是NFIA抑制PRRSV复制的关键.结果 表明,核因子I/A(NFIA)主要依赖其DNA结合结构域的二聚化与DNA结合功能来抑制PRRSV复制.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、NFIA、DNA结合/二聚化结构域、位点突变

所属期刊栏目：40

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金重大基础研究计划资助项目;国家自然科学基金青年基金资助项目;河南省自然科学基金资助项目;农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室开放课题资助项目;河南省高等学校重点科研资助项目;河南师范大学优秀青年科学基金资助项目

在线出版日期：2020-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1087-1095