非洲猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

建立一种TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于非洲猪瘟病毒(African swinefever virus,ASFV)保守结构蛋白P72基因的检测.参照GenBank登录的ASFV P72相关基因序列,设计合成1对特异性引物与1个TaqMan探针,通过对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ASFV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,对该方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证.结果 显示,该方法能有效扩增1.0×100～1.0×109拷贝/μL ASFV-P72标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系;检测灵敏度为1.0×100拷贝;对猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等病原不发生交叉反应;重复性试验结果显示变异系数(CV)小于1％.结果 表明,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于临床样本中ASFV的检测,从而更好地对ASF疫情进行监测和诊断.

关键词：非洲猪瘟病毒、P72基因、TaqMan实时荧光定量PCR

所属期刊栏目：40

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划资助项目;许昌市基础与前沿资助项目

在线出版日期：2020-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：888-891,896