猪伪狂犬病病毒变异株gE/gI/TK三基因缺失突变株的构建及纯化

摘要：

根据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV) UL区基因序列(KJ789182)设计2对特异性引物,扩增PRV NY株TK基因两侧序列,克隆至pUC-19载体,然后绿色荧光蛋白标记基因,构建转移质粒pUC-TKLRE.用转移质粒pUC-TKLRE和PRV双基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-DNA共转染ST细胞,通过蚀斑纯化,获得表达荧光蛋白的PRV三基因缺失突变株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+.经PCR鉴定及测序,证实获得的三基因缺失株rPRV NY-gE-/gI-/TK--EGFP+在TK基因上缺失了311 bp.该病毒与亲本株PRV NY在ST细胞上培养时,具有相似的生长曲线,但其体外生长动力学比亲本株弱;且对非靶标动物小鼠是安全的.结果 表明,本试验采用同源重组,同时结合蚀斑克隆纯化技术,成功构建了1株以目前PRV流行变异株为亲本株的gE/gI/TK三基因缺失病毒,为防控当前PRV变异毒株的疫情、根除PR提供技术支持.

关键词：PRV、变异株、同源重组、gE/gI/TK三基因缺失

所属期刊栏目：40

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划资助项目;河南省高校科技创新团队支持计划资助项目;河南省科技开放合作项目

在线出版日期：2020-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：476-482