塞尼卡病毒VP1与VP3蛋白原核表达及蛋白纯化

摘要：

利用原核表达系统表达塞尼卡病毒(Seneca Valley virus,SVV) VP1与VP3蛋白,优化其诱导表达条件,并进行蛋白纯化研究.扩增SVV VP1与VP3目的基因,并分别将VP1、VP3克隆至pET32a(+)载体,构建pET32a-VP1与pET32a-VP3重组质粒,将两者分别转化至BL21(DE3)大肠杆菌,经IPTG诱导表达.优化蛋白表达条件,利用His标签镍离子蛋白纯化拄纯化蛋白.RT-PCR结果显示可扩增出792 bp SVV VP1与717 bp VP3目的片段,将VP1与VP3目的基因成功克隆至pET32a(+)载体,分别转化至BL21(DE3),成功地表达50 000 pET32a-VP1重组蛋白以及48 000 pET32a-VP3重组蛋白;pET32a-VP1及pET32a-VP3重组蛋白均在条件为37℃、0.6 mmol/L诱导剂诱导5h表达量最高,重组蛋白均以包涵体的形式进行表达并且可纯化出目的蛋白.结果 表明,本试验成功地利用原核表达系统表达并纯化SVV VP1与VP3重组蛋白,为制备单克隆与多克隆抗体、检测试剂盒研发以及新型疫苗的研发奠定了基础.

关键词：塞尼卡病毒、VP1、VP3、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：40

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划资助项目2018YFD0500104

在线出版日期：2020-05-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：463-468,475