10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.10.16
羊鞭虫病实时荧光PCR检测方法的建立
为建立一种快速检测羊鞭虫病实时荧光PCR方法,根据GenBank已经公布的羊鞭虫(Trichuris ovis)ITS基因序列(登录号:JF680987.1),设计特异性引物和TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,建立检测羊鞭虫病的TaqMan实时荧光PCR方法.对反应体系的特异性、敏感性和稳定性进行评价,并用该方法对临床样品进行检测.结果 显示,该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R2 =0.994,扩增效率E=1.05.该方法特异性强,与其他8种常见家畜寄生性线虫病不发生交叉反应;灵敏度高,最低检出下限为31.7拷贝/μL;重复性好,组内和组间变异系数分别为0.43%~1.04%和1.20%~1.91%,均小于2.00%.用建立的实时荧光PCR方法和显微镜检查方法分别对20份临床样品进行检测,实时荧光PCR和显微镜检查方法检出的阳性样品分别为14和9份.本研究建立的TaqMan实时荧光PCR方法能在粪便中快速、准确、灵敏检测羊鞭虫卵,为羊鞭虫病的检测和防控提供新的方法.
鞭虫、ITS基因、TaqMan探针、实时荧光PCR
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S855.9(动物医学(兽医学))
内蒙古检验检疫局自立科技基金资助项目NMCIQ-IK2017-012
2019-11-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
共6页
1981-1986