裂谷热病毒eGn蛋白的制备及免疫原性验证

摘要：

通过PCR扩增裂谷热病毒(RVFV) Gn蛋白胞外区(eGn)基因,连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-RVFV-eGn.将重组质粒转化至感受态BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTM FF蛋白纯化柱纯化目的蛋白.将目的蛋白免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,免疫荧光鉴定制备的单克隆抗体特性.结果 显示,PCR扩增出1 287 bp的目的基因;构建的重组质粒转化BL21细胞后可有效表达目的蛋白,确定最佳表达条件为30℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5h,目的蛋白以包涵体形式表达;纯化后目的蛋白纯度为94.136％;制备的单克隆抗体可特异性识别哺乳动物细胞表达的Gn蛋白,表明RVFV eGn蛋白具有良好的免疫原性.研究结果为裂谷热新型疫苗和快速诊断试剂的研制奠定基础.

关键词：裂谷热病毒、Gn胞外区(eGn)、单克隆抗体

所属期刊栏目：39

分类号：S852.65;R535(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家科技支撑计划基金资助项目2015BAD12B04

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1506-1512