OEPR法构建mETX-mCPA表达质粒及其重组蛋白的免疫效果评价

摘要：

为了确定产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)和α毒素(CPA)无毒突变体作为亚单位疫苗同时预防D型和A型产气荚膜梭菌病的免疫效果,试验用点突变结合OEPR法构建重组质粒pET32a-mETX-mCPA.将阳性重组质粒转入E.coli BL21 (DE3)中,以预先添加乳糖的自诱导培养基表达目的蛋白.经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白相对分子质量约为92 000,与预期值一致.Western blot检测结果表明,重组蛋白可被A型产气荚膜梭菌阳性血清所识别.致死性试验结果表明,重组蛋白不致死小鼠.以铝胶为佐剂将重组蛋白免疫家兔,二免血清0.1 mL可分别中和3个小鼠MLD的A型毒素和i00个小鼠MLD的D型毒素.本研究用OEPR法成功构建了无毒突变体pET32a-mETX-mCPA质粒,获得的重组蛋白在家兔上显示出良好的免疫效果,为研发A、D型产气荚膜梭菌二价亚单位疫苗奠定理论基础.

关键词：ETX、CPA、产气荚膜梭菌、OEPR法、免疫效果、家兔

所属期刊栏目：39

分类号：S852.61;R535(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划基金资助项目2017YFD0500905

在线出版日期：2019-10-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1500-1505