牛支原体P48蛋白及其片段的表达、纯化及间接ELISA检测方法的建立

摘要：

为了建立一种快速、特异、敏感的检测牛支原体血清抗体的方法,对牛支原体(M.bovis)P48膜蛋白基因进行密码子优化,并在编码基因两端加入酶切位点.利用生物学软件对P48蛋白进行抗原位点和亲水性分析,选择P48蛋白的主要抗原表位区和亲水性区域以及全基因进行原核表达.采用SDS-PAGE和Western blot对重组蛋白进行鉴定及反应原性分析.结果显示,表达的P48全蛋白、28～185、221～455位氨基酸区域蛋白均能与牛支原体阳性血清发生特异性反应,P48(221～455)效果最好.采用Ni-NTA对目的蛋白进行纯化,并基于纯化的P48(221～455)蛋白建立了一种间接ELISA检测方法.该方法组内及组间变异系数均小于7％,重复性较好.临床样本检测结果表明,建立的检测方法符合率较高.

关键词：牛支原体、P48蛋白、原核表达、蛋白纯化、间接ELISA

所属期刊栏目：39

分类号：S852.62(动物医学（兽医学）)

资助基金：吉林省科技发展计划资助项目20140309024NY,20160623024TC

在线出版日期：2019-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：678-682,694