非典型猪瘟病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

参照GenBank上登录的非典型猪瘟病毒(atypical porcine pestivirus virus,APPV)全基因组序列设计特异性引物成功从感染APPV阳性样品中扩增出270 bp的APPV基因片段,并将其克隆到pEASY-Bluent Zero Cloning Kit载体,以纯化的重组质粒为模板优化反应条件,建立了检测APPV的特异性荧光定量PCR方法.结果显示,建立的荧光定量PCR方法Ct值与标准品在1.49×101～1.49×1010 copies/μL呈现良好的线性关系,相关系数为R20.999,斜率为-3.442,扩增效率为95.207％.该方法与PCV2、PRV、PRRSV、PPV及CSFV基因组均无交叉反应,敏感性比常规PCR高出1 000倍,组内和组间重复试验变异系数均小于2％.对临床采集的20份疑似感染APPV的样品进行检测,结果显示应用所建立的荧光定量PCR成功检测到3份APPV阳性样品,而常规PCR仅检测到1份,表明所建立的荧光定量PCR比常规PCR灵敏度更高.本试验所建立的APPV SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法,可实现对APPV早期诊断及感染进行定量分析检测.

关键词：非典型猪瘟、仔猪先天震颤、荧光定量PCR

所属期刊栏目：39

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划资助项目2017YFD0501803,2017YFD0500101

在线出版日期：2019-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：622-626