靶向抑制PRRSV复制的Nsp9/shRNA的筛选及干扰

摘要：

RNAi技术可以特异性别除或关闭特定基因的表达,使机体具有抗病毒的功效,本试验针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp9基因设计多对shRNA序列,并从细胞水平验证其干扰效果,从中筛选可以使Nsp9基因沉默的优势shRNA序列.利用BLOCK-iTTM RNAi Designer软件设计并合成shRNA对应的DNA序列-ds Oligo,构建入门载体pENTR/U6/shRNA;采用共转染技术,经荧光显微镜观察、流式细胞仪检测及Real-time RT-PCR分析等方法筛选优势干扰序列.结果显示:成功构建的6对pENTR/U6/Nsp9-shRNA均具有抑制Nsp9基因表达的效果,其中pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6的抑制效果更为突出,同时成功构建1对无意义对照pENTR/U6/con-shRNA.结果表明:pENTR/U6/Nsp9-4和pENTR/U6/Nsp9-6两株优势干扰序列的成功筛选可为构建具有干扰PRRSV复制效果的稳定细胞系以及靶向PRRSV的siRNA的转基因动物提供素材.

关键词：PRRSV、Nsp9/shRNA、RNA干扰、筛选

所属期刊栏目：39

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家“863”高技术研究发展计划资助项目2006AA241110

在线出版日期：2019-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：14-20