流行性出血病病毒抗原捕获ELISA方法的建立

摘要：

为建立流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,本试验用纯化处理的4种血清型病毒(EHDV-2、5、6和8)混合免疫兔和豚鼠,制备高免血清.以兔抗EHDV为捕获抗体,豚鼠抗EHDV为检测抗体,羊抗豚鼠IgG-HRP为酶标抗体,建立了EHDV抗原捕获ELISA(antigen capture ELISA,AC-ELISA)方法.通过反应条件优化,获得最佳工作条件:5％马血清为稀释液,包被抗体1∶15000稀释,检测抗体1∶20000稀释,酶标抗体1∶15000稀释.通过检测60份阴性样品确定临界值,P/N值≥2为阳性、P/N值＜1.5为阴性;特异性试验表明该方法仅能检测出各血清型EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、赤羽病病毒(AKAV)及中山病毒(CHUV)无交叉反应;敏感性试验表明该方法可以检出102.47±007TCID50的病毒;批内和批间变异系数均＜10％;用RT-PCR与该方法同时对70份参考样品进行检测,符合率为92.86％.表明本试验建立的AC-ELISA方法为EHDV抗原检测提供了一种可靠实用的技术手段.

关键词：流行性出血病病毒、抗原捕获ELISA、多克隆抗体

所属期刊栏目：39

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划资助项目2016YFD0500908;国家公益性行业农业科研专项资助项目201303035

在线出版日期：2019-05-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1-7