10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.01.01
流行性出血病病毒抗原捕获ELISA方法的建立
为建立流行性出血病病毒(EHDV)病原学检测方法,本试验用纯化处理的4种血清型病毒(EHDV-2、5、6和8)混合免疫兔和豚鼠,制备高免血清.以兔抗EHDV为捕获抗体,豚鼠抗EHDV为检测抗体,羊抗豚鼠IgG-HRP为酶标抗体,建立了EHDV抗原捕获ELISA(antigen capture ELISA,AC-ELISA)方法.通过反应条件优化,获得最佳工作条件:5%马血清为稀释液,包被抗体1∶15000稀释,检测抗体1∶20000稀释,酶标抗体1∶15000稀释.通过检测60份阴性样品确定临界值,P/N值≥2为阳性、P/N值<1.5为阴性;特异性试验表明该方法仅能检测出各血清型EHDV、蓝舌病病毒(BTV)、赤羽病病毒(AKAV)及中山病毒(CHUV)无交叉反应;敏感性试验表明该方法可以检出102.47±007TCID50的病毒;批内和批间变异系数均<10%;用RT-PCR与该方法同时对70份参考样品进行检测,符合率为92.86%.表明本试验建立的AC-ELISA方法为EHDV抗原检测提供了一种可靠实用的技术手段.
流行性出血病病毒、抗原捕获ELISA、多克隆抗体
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S852.65(动物医学(兽医学))
国家重点研发计划资助项目2016YFD0500908;国家公益性行业农业科研专项资助项目201303035
2019-05-05(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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