北极狐TYRP1基因启动子活性及转录调控区域分析

摘要：

通过分析调控北极狐毛色基因TYRP1启动子核心区域及转录因子,为探究该基因的表达调控机制提供理论依据,并为狐狸毛皮品质分子育种和彩色毛皮新材料的创制提供思路.通过基因组测序技术获得了北极狐TYRP1基因启动子序列,并利用生物信息学方法对北极狐TYRP1基因核心启动子区域和转录因子结合位点进行预测;以北极狐基因组DNA为模板,PCR扩增北极狐TYRP1基因不同长度的启动子缺失片段克隆至pGL3-Basic载体,将重组质粒瞬时转染到A375和293T细胞,利用双荧光素酶基因检测仪进行活性验证.结果表明,成功构建了9个含有不同长度启动子片段的重组质粒,经双荧光素酶活性检测发现北极狐TYRP1基因-699/+35区域为核心启动子区域,-699/-93区域存在着TYRP1基因正调控元件.生物信息学预测分析发现该区域存在4个转录因子结合位点;利用重叠延伸PCR技术成功构建了4个突变载体,经双荧光素酶活性检测发现4个突变载体活性均显著下降(P＜0.05),表明这4个转录因子是北极狐TYRP1基因转录调控的正调控元件.本研究确定了北极狐TYRP1基因启动子核心区域-699/+35,Sp1(-656/-646)、CREB(-598/-589)、Sp1(-539/-530)和Sp1(-163/-154)为北极狐TYRP1基因转录的正调控元件.

关键词：北极狐、TYRP1基因、启动子、点突变、转录调控

所属期刊栏目：38

分类号：Q78;S865.23(基因工程（遗传工程）)

资助基金：河北省自然科学基金重点资助项目C2016407114;国家自然科学基金资助项目31501940;河北省高校创新团队领军人才培育计划资助项目LJRC004;河北省自然科学基金资助项目C2017407037;河北省高等学校青年拔尖人才计划资助项目BJ2016026;河北省自然科学基金资助项目C2017407040

在线出版日期：2019-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：2366-2373