鹅多瘤病毒VP1基因的克隆及EvaGreen实时荧光定量PCR方法的建立

摘要：

针对鹅多瘤病毒(goose hemorrhagic polyomavirus,GHPV) VP1基因核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,从1株樱桃谷鸭源GHPV(命名为FJ201601株)扩增获得VP1基因核苷酸序列全长,并进行核苷酸同源性比较和遗传进化分析,明确其VP1基因分子特征.基于GHPV各分离株VP1基因特点,设计特异性的实时荧光定量PCR引物,建立基于EvaGreen实时荧光定量PCR检测GHPV方法.结果显示,克隆的FJ201601株VP1基因全长为1 062 bp,与GHPV各参考分离株核苷酸同源性为99.7％～100.0％;在遗传进化上可将GHPV分为2个大的遗传进化分支(Clade 1和Clade 2),FJ201601株属于Clade 2分支.建立的EvaGreen检测GHPV实时荧光定量PCR检测方法,其标准曲线方程y轴截距为39.12,斜率为-3.489,扩增相关系数为0.996,扩增效率为99.7％;敏感性强,最低检测限为88.0拷贝/μL;特异性好,扩增产物的溶解曲线分析只出现单一的特异峰,Tm值为(82.18±0.22)℃,无引物二聚体,对水禽常见病原检测均为阴性;重复性好,组内变异系数和组间变异系数分别为0.62％～1.76％和0.92％～2.44％.用建立的检测方法对80份多品种生长不良鸭进行检测发现4份阳性(樱桃谷鸭2份、麻鸭2份),阳性率为5％(4/80).本研究证实麻鸭中存在GHPV感染,为丰富GHPV感染宿主谱和开展GHPV感染流行病学调查和致病机理研究提供检测手段.

关键词：鹅多瘤病毒、VP1基因、EvaGreen实时荧光定量PCR方法、樱桃谷鸭、麻鸭

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31602068;国家水禽产业技术体系资助项目CARS-42;福建省农业科学院青年科技创新团队资助项目STIT2017-3-10;福建省农业科学院青年科技英才资助项目YC2015-12;福建省属公益类资助项目2018R1023-5

在线出版日期：2019-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2289-2295