猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒二重Luminex x-TAG方法的建立

摘要：

为了建立一种快速、特异、灵敏且能同时检测猪细小病毒(PPV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)二重Luminex x-TAG方法,参照GenBank中PPV的NS-1基因序列和PRV的ICP8基因序列,设计了2对特异性引物,其中上游引物5'端加一段TAG序列,下游引物5'端用生物素标记,进行二重PCR扩增.然后将PCR产物与链霉亲和素-藻红蛋白、磁珠混匀,42℃孵育25 min,混合物在Luminex200仪器上进行读数分析.并用该方法进行特异性、灵敏度、重复性及临床样品的检测.结果显示,该方法与其他猪的病原无交叉反应,两者的检测下限都可达1×102 copies/μL,批内批间的变异系数都在4％以下;在30份临床样品中,PPV和PRV的检出率分别为13.3％和60.0％,比普通PCR的检出率高.结果表明,本研究建立的二重Luminex x-TAG方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好,可同时检测PPV和PRV两种病毒,可用于猪场中PPV和PRV的流行病学调查.

关键词：猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、Luminex x-TAG

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：广东省科技计划资助项目2015B070701003,2016A040403060,2017A070702001,2017B030314171;广州市科技计划资助项目201707010440,2016201604030059

在线出版日期：2019-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：2258-2261