变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)S和N融合双基因质粒的构建及鉴定

摘要：

为构建变异猪流行性腹泻病毒(PEDV)的S和N融合双基因质粒并表达出相应的蛋白,通过扩增变异PEDV的S和N基因,将S基因连接到pEAS-Blunt M2(M2)真核表达载体,构建M2-S质粒,通过同源重组原理,采用无缝拼接试剂盒将N基因克隆至M2-S基因片段,再转化到Trans1-T1感受态细胞中,构建M2-S-N融合双基因质粒.将M2-S-N融合双基因质粒转染到293T细胞,可表达出相应的S-N融合双基因蛋白.利用RT-PCR、Western blot技术和免疫BLAB/c鼠试验鉴定载体及蛋白表达的免疫活性,结果成功构建了M2-S-N融合双基因质粒,并表达出具有免疫原性的S-N融合双基因蛋白,且该蛋白能够诱导小鼠产生特异性抗体.变异PEDV的S和N基因融合双基因质粒的构建,为进一步开展变异PEDV的诊断技术及基因工程疫苗等研究奠定良好基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV)、S基因、N基因、M2-S-N融合双基因

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家公益类科研院所专项资助项目2018R1023-4;福建省农科院畜牧兽医创新团队资助项目STIT2017-1-5

在线出版日期：2019-01-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2241-2246