猪细小病毒NS1基因的克隆、表达及密码子优化提高表达水平

摘要：

通过PCR方法从猪细小病毒(PPV)基因组中扩增NS1基因,将其克隆到pcDNA3.1A质粒中,构建成与Myc/His标签融合的NS1真核表达载体.将表达载体转染PK-15细胞使其表达.利用猪偏爱的密码子对NS1全基因进行了密码子优化,通过构建表达载体和转染细胞,检测并比较了密码子优化前后的表达水平.结果显示:扩增的NS1基因与GenBank序列一致,构建的表达载体结构正确;Western blot检测表明,NS1基因能够在PK-15细胞中进行表达,但表达水平很低,有时检测不到,从而严重影响对其的进一步研究;密码子优化后NS1基因的表达水平由优化前的7μg/T25培养瓶增加至32μg/T25培养瓶,是原来的4倍.可见密码子优化可明显提高NS1蛋白在PK-15细胞中的表达,这为下一步研究NS1蛋白的功能提供了有利条件.

关键词：NS1基因、猪细小病毒、密码子优化

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河北省教育厅资助项目QN2016189;国家“十三五”重点研发计划子课题资助项目2016YFD0501002

在线出版日期：2018-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1840-1845