猪源化抗PEDV单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

通过BL21(DE3)原核表达系统制备抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)猪源化单链抗体scFv-Fc.提取抗PEDV杂交瘤细胞2D1的总RNA,通过反转录与SOE-PCR方法获得单链抗体scFv基因,同时提取猪脾脏组织的总RNA,RT-PCR获得猪免疫球蛋白恒定区Fc基因.通过SOE-PCR方法将scFv与Fc连接获得猪源性单链抗体scFv-Fc融合基因,构建重组质粒pET-28a-scFv-Fc,将该重组质粒转入BL21(DE3)原核表达菌进行诱导表达,SDS-PAGE分析及Western blot检测融合蛋白的特异性,再对表达蛋白进行纯化和复性,通过间接ELISA鉴定融合蛋白与PEDV的结合活性.结果显示,插入pET-28a载体的scFv-Fc序列长度0 128 bp,抗PEDV猪源化单链抗体的相对分子质量为45 800.重组蛋白具有较高的特异性.本研究成功构建了pET-28a-scFv-Fc原核表达系统,重组蛋白具有较高的免疫反应性,为PEDV重组抗体的研究奠定理论基础.

关键词：猪流行性腹泻病毒、单链抗体、SOE-PCR、Western blot

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省高等学校重点科研资助项目16A180005;河南农业大学青年创新基金资助项目30601444

在线出版日期：2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1467-1472