O型口蹄疫病毒衣壳蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化及电镜检测

摘要：

本试验旨在表达出高可溶性的O型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白,并通过电镜检测,以期望形成纳米样颗粒.根据O型FMDV核酸序列,得到FMDV O/GER/Wup/82株的农壳蛋白基因,并进行截短和优化,共133个氨基酸;同时,从肠道沙门菌(Salmonella enterica)中分离得到135个氨基酸铁蛋白(Ferritin)基因片段,将O型FMDV衣壳蛋白与铁蛋白串联,设计并合成了FMDV衣壳蛋白-铁蛋白基因片段,命名为SeFnt16599.构建了SeFnt16599融合Grifin、GST、MBP、Sumo、Thioredoxin、γ-crystallin、ArsC、PpiB、CeHSP17等9种不同可溶性标签的表达重组载体.分别转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中,IPTG诱导,SDS-PAGE电泳对融合蛋白的可溶性表达进行检测,筛选出高可溶性表达的SeFnt16599融合蛋白.重组蛋白通过Ni-NTA Agarose亲和纯化,进行电镜检测.结果表明,成功构建9种SeFnt16599表达载体;9个标签中,MBP与SeFnt16599蛋白相融合的可溶性表达效果最好,并获得了高纯度的MBP-SeFnt 16599重组蛋白质;电镜结果显示,MBP-SeFnt16599形成了纳米样颗粒.本试验建立了稳定获得SeFnt16599重组蛋白质的试验方法,为FMDV衣壳蛋白新型结构疫苗的开发及后续研究奠定了基础.

关键词：O型口蹄疫病毒、衣壳蛋白、铁蛋白、融合标签、可溶性、纳米颗粒

所属期刊栏目：38

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：农业部“948”重点计划资助项目2011-G35;国家转基因重大专项资助项目2014ZX0801015B;河南省高等学校重点科研资助项目17A230013

在线出版日期：2018-10-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1265-1271