表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

摘要：

应用反向遗传技术对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV) LaSota株感染性克隆PBRN-FL质粒进行操作,构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定.依据GenBank所发表的欧洲型PRRSV LV株ORF5序列,设计引物扩增ORF5片段,通过PBRN-FL质粒上P和M基因间的Pme Ⅰ酶切位点插入目的片段,构建重组质粒LaSota-ORF5.采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI-NP、PCI-P、PCI-L等3种辅助质粒共转染BSR-T7/5/细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)和Western blot(WB)试验鉴定.结果显示:拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确,IFA出现绿色荧光,WB试验条带大小符合预期,证明GP5蛋白有效表达.结果表明:成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5,为制备表达PRRSV GP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础.

关键词：新城疫病毒、LaSota、GP5蛋白、病毒拯救

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31272573;吉林省自然科学基金资助项目20130101093JC;吉林省科技发展计划项目20140623019TC,20160623024TC

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：841-845