嗜吞噬细胞无浆体SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为建立荧光定量PCR方法检测嗜吞噬细胞无浆体(Anaplasma phagocytophilum),针对GenBank A.phagocytophilum 16S rRNA基因保守序列(JN558815),设计1对引物1-25 F/183-205R.以已知引物EE1/EE2和该引物进行巢式PCR扩增出预期大小片段(205 bp),构建含有16S rRNA基因的重组质粒,以质粒为模板构建了标准曲线.以1-25 F/183-205R为荧光定量PCR引物,建立A.phagocytophilum荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性、重复性试验和临床样本检测.结果表明,该方法在6.4×103～6.4×108 copies/μL相关系数为0.99,显示出良好的线性关系;所建方法能特异地检出A.phagoc ytophilum,对绵羊无浆体、牛无浆体和环形泰勒虫基因组DNA和灭菌双蒸水均无交叉反应;可检测到6.4×102 copies/μL的标准质粒DNA,比常规PCR敏感性高100倍;批内及批间变异系数均低于2.0％,具有较高的重复性和稳定性;利用该方法对30份羊血液临床样品检出率比巢式PCR高16.67％.该研究为A.phagocytophilum临床检测和定量分析病原感染程度奠定理论基础.

关键词：嗜吞噬细胞无浆体、荧光定量PCR、16S rRNA基因

所属期刊栏目：38

分类号：S852.62;R535(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家现代肉羊产业技术体系基金资助项目nycytx-39;河南省教育厅现代畜牧业河南省协同创新中心资助项目

在线出版日期：2018-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：722-726,735