猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建

摘要：

为构建猪C型凝集素受体8A(C-type lectin domain family 8,member A,CLEC8A)的单域抗体酵母展示文库,本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列.通过SMART软件分析,鉴定出该受体胞外区基因序列,并插入原核表达栽体pET28a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白.表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼,间接ELISA监测抗体滴度,于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞.提取总RNA,反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼VHH基因.纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞(EBY100),经细胞内同源重组,成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库.经菌落计数及测序鉴定结果表明,文库大小约为1.6×10 7,文库重组率达90％,文库多样性丰富.流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体,为后续文库筛选奠定基础.

关键词：猪CLEC8A基因、骆驼单域抗体、酵母展示文库、流式细胞术

所属期刊栏目：38

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家自然科学基金面上资助项目31372422

在线出版日期：2018-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：177-182