内含猪繁殖与呼吸综合征病毒保守基因序列假病毒粒子的构建及应用

摘要：

为构建内含猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因序列的假病毒粒子,将MS2噬菌体基因组中5’非编码区、成熟酶蛋白基因、衣壳蛋白基因、包装位点和复制酶基因部分起始位点的cDNA序列克隆于原核表达载体pET32a,在其下游插入PRRSV ORF7和3’非编码区保守序列,获得重组表达载体pET-MS2-PRRSV.将重组质粒pET-MS2-PRRSV转化表达菌株BL21(DE3),经诱导表达、纯化,获得高纯度的病毒样颗粒.病毒样颗粒经RT-PCR和PCR鉴定含有PRRSV ORF7和3'非编码区RNA且没有质粒DNA残留,并能耐受RNase降解.采用荧光定量RT-PCR对病毒样颗粒定值后,制备了用于PRRSV核酸检测的标准品,该标准品模拟了真实病毒粒子的结构,无生物传染性,经检测均匀性和稳定性良好,可作为PRRSV核酸检测的阳性标准质控品,实现对核酸检测的全程监控.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、ORF7、3’非编码区、病毒样颗粒

所属期刊栏目：36

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家公益性行业科研专项资助项目201310253

在线出版日期：2017-01-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2024-2029