创伤弧菌和副溶血弧菌双重LAMP检测方法的建立及初步应用

摘要：

为建立创伤弧菌和副溶血弧菌的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,本试验以创伤弧菌metalloprotease基因和副溶血弧菌ompA基因为靶点设计LAMP扩增引物,并在内引物间添加不同的酶切位点,通过对反应时间和温度的优化及酶切反应,成功建立了双重LAMP检测方法,并对其检测特异性、灵敏度和实际应用性进行了研究.结果显示,62℃反应45 min时可同时检测到2种弧菌的存在,通过限制性内切酶酶切,可准确区分2种弧菌.该方法比普通PCR检测方法灵敏度高102～103倍.选择17株细菌菌株作为检测模板,发现除创伤弧菌和副溶血弧菌反应结果呈阳性外,其他均为阴性.以大菱鲆作为实验动物,检测双重LAMP技术的实际应用可能,该方法可准确检测并鉴定出组织和血液中感染的细菌种类,其灵敏度可达374～410 CFU/g (mL).SYBR Green Ⅰ是一种结合于DNA双链小沟中的荧光染料,反应产物加入该染料后,极易用肉眼判别.本试验成功建立了创伤弧菌和副溶血弧菌的双重LAMP检测方法,该方法可用于水产养殖中病原菌的早期诊断.

关键词：创伤弧菌、metalloprotease基因、副溶血弧菌、ompA基因、双重LAMP

所属期刊栏目：36

分类号：S852.61(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省农业重大应用技术创新项目;山东省现代农业产业技术体系鱼类产业创新团队项目

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1875-1881