猪血凝性脑脊髓炎病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立与应用

摘要：

为建立检测猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)血清抗体的间接ELISA方法,构建了高效表达PHEV核衣壳蛋白(N)的重组质粒(pET28a-N),Western blot检测该重组蛋白具有较好的免疫原性.以纯化的N重组蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为2 mg/L,酶标二抗的最佳稀释倍数为1∶10 000,建立了用于PHEV抗体检测间接ELISA方法.此外,用该法(N-ELISA)对天津市地区采集到的200份猪血清样品进行检测,阳性检出率为83.5％,与前期工作中建立的全病毒作为包被抗原的间接ELISA诊断方法(HEV ELISA)检测结果的符合率为90.91％.结果表明:以重组N蛋白为包被抗原所建立的用于PHEV血清抗体检测的方法能够用于检测PHEV感染及相关的流行病学调查.

关键词：猪血凝性脑脊髓炎病毒、重组N蛋白、间接ELISA、血清抗体

所属期刊栏目：36

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31272530;国家重点研发计划资助项目2016YFD0500707;吉林省青年科研基金资助项目20160520033JH

在线出版日期：2017-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1813-1817